胃蛋白酶原（PG）的定量检测方法

胃蛋白酶原（PG）是一种胃蛋白酶非活性前体，包含PGⅠ和PGⅡ两个亚群。人体血清胃蛋白酶原的含量变化可反应胃粘膜的功能情况。血清PGⅠ和PGⅠ/PGⅡ（PGR）值下降是临床早期胃癌筛选的有效指标。除了PG水平，临床上还需结合患者体内G17水平、幽门螺杆菌（HP）水平以及胃镜活检等其他检测结果才能做出准确的诊断。胃蛋白酶原的临床定量检测方法较多，目前主要有流式荧光发光免疫微球、时间分辨荧光免疫、乳胶增强免疫比浊、化学发光免疫分析、酶联免疫吸附以及放射免疫分析等方法。

原理简介

1. 流式荧光发光免疫微球分析技术（Flow fluorenscence immunmicrobeads assay, FFIA）

该技术以荧光编码微球和双激光流式检测技术为核心，通过荧光标记PG抗体溶液，加入检测样本，再加入交联特异性捕获抗体的荧光编码微球悬液，形成夹心复合物（交联捕获抗体的编码微球-PG抗原-荧光标记PG抗体复合物）。复合物被鞘液隔开逐一通过激光检测，通过不同的激光通道分别识别出编码的微球和荧光标记PG抗体。编码微球上的标记抗体荧光值与样本中的PG抗原呈正比，再通过相应的校准品标准曲线计算出相应的样本PG含量。

2. 时间分辨荧光免疫分析（Time-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA）

在荧光分析的基础上发展而来。利用镧系元素荧光寿命长的特点，根据波长和时间进行信号分辨，有效排除非特异性荧光。采用镧系元素标记胃蛋白酶原抗原；与检测样本发生免疫反应，最后检测荧光强度来判定样品中抗原的水平。

3. 乳胶增强免疫比浊（Particle enhanced turbidimetric immunoassay, PETIA）

由免疫比浊的方法发展而来，分为散射比浊和透射比浊两种检测法。其原理相似，都是将单克隆PG抗体交联到胶乳颗粒表面；加入检测样本，发生免疫反应，生成抗原-抗体-胶乳颗粒复合物；反应液的散光性或透光性能改变，其浊度变化程度与样本中的胃蛋白酶原抗原浓度呈正相关。

4. 化学发光免疫分析（Chemiluminescence immunoassay, CLIA）

此方法原理是用发光物质或酶标记PG抗体，与样本中的胃蛋白酶原抗原反生免疫反应后，加入氧化剂或者酶底物而发光，通过检测发光强度，根据标准曲线判定样本中PG抗原浓度。其标记物主要有化学发光物质、酶标记两类；常用标记物分别为吖啶酯类化合物（AE）和辣根过氧化物酶(HRP)。

5. 酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）

常用的反应方式有双抗夹心、竞争、间接、直接ELISA。其原理用酶标记的抗体或者抗原指示免疫反应，先将已知的抗原或抗体包被在固相载体表面，使免疫反应在固定相上进行。通过酶底物显色反应判定是否存在免疫反应，根据颜色深浅进行半定量，目前常用标记物为HRP。

6. 放射免疫分析（Radioimmunoassay, RIA）

主要原理是竞争性抑制，利用放射性核素标记提纯的PG抗原，待测样本中的PG抗原与标记PG抗原共同与定量的PG抗体结合。反应平衡后，通过测定放射性强度，求得未标记的样本PG抗原含量。

检测方法比较

如表1所示，放射免疫分析由于其示踪物质具有放射性，所以应用受限，普适性差。ELISA成本低，可进行定性和半定量，适用于基层医院。近年来乳胶增强免疫比浊、化学发光免疫分析应用广泛，这两种方法成本相对较低，灵敏度高于ELISA，适用于大、中型医院。流式荧光发光免疫微球和时间分辨荧光免疫分析灵敏度高，但成本高，检测需要配备昂贵的仪器，适用于有条件的医院。

表1 检测方法比较

参考文献

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